Museets emne er Danmarks jernbane- og færgehistorie fra 1844 til vore dage. Udstillingen er på ca. 5000 m2 og omfatter bl.a. jernbanevogne og lokomotiver - både damp og diesel - fra 1850'erne og frem.
Stor udstilling af kongelige salonvogne. Under Danmarks Jernbanemuseum hører DSB Museumstog, som restaurerer og vedligeholder vogne og lokomotiver og står for kørsel med museets tog.
Danmarks Jernbanemuseum ejes af DSB, men støttes også økonomisk af Banedanmark. Udstilling og ledelse er beliggende i Odense.